Jennifer, nascida Elizabeth Marshall, era filha do astro de cinema Jack Holt e Margaret Wood Holt; ela tinha uma meia-irmã mais velha do casamento anterior de suas mães, chamada Imogene e um irmão, Charles John Holt III, apelidado de Tim Holt. Mais tarde, ela mudaria seu nome para Jennifer por razões profissionais. A neta do industrial Henry Morton Stanley Wood, de St. Paul, Minnesota, proprietária da American Hoist & Derrick, conhecida mundialmente por suas pás a vapor, emigrou da Inglaterra. Sua avó paterna era bisneta de John Marshall, presidente da Suprema Corte dos EUA 1801-1835. Seu avô, o primeiro John Charles Holt, era ministro episcopal também da Virgínia.

A família Holt morava em Beverly Hills, Califórnia e tinha um rancho em Fresno. Aos sete anos de idade, Jennifer foi para a Bélgica com sua governanta "Mademoiselle", onde a visita de um ano durou dois anos e meio. Em 1931, em seu retorno, seus pais se separaram e ela se juntou brevemente à mãe e Imogene em Scarsdale, Nova York, antes de se mudar com eles para Santiago, Chile. Ao retornar à Califórnia, Jennifer frequentou a The Bishop School em La Jolla e, após anos de separação, conseguiu restabelecer um relacionamento com o irmão; de fato, seu primeiro encontro foi com Hal Roach Jr., colega de quarto de Tim da Culver Military Academy.

Jennifer estudou atuação com a atriz e professora russa Maria Ouspenskaya em seu primeiro ano fora do ensino médio. Ela também estudou música e queria ser cantora. Mais tarde, ela estudou e se apresentou no Peterborough Players em New Hampshire por um ano, apareceu em produções de "The Babbitt", "The Far Off Hills" e "Our Town", supervisionadas pelo dramaturgo Thornton Wilder.

Encontrando poucas oportunidades na Broadway, Jennifer retornou a Hollywood. Ao visitar seu irmão Tim em um rodeio em Reno, Nevada, ela conheceu o agente de Jerry Colonna, Bruce Geer, que conseguiu negociar um acordo com o produtor Harry Sherman dos serviços de Colonna para uma parte do filme de Hopalong Cassidy, Vaqueiro Detetive (1941), ela foi anunciada como "Jacqueline Holt". Após seu lançamento, ela assinou um contrato de seis anos com a Universal Pictures usando o nome profissional de "Jennifer Holt". Em sua carreira cinematográfica, ela estrelou com William Boyd (Hopalong Cassidy), Russell Hayden, Rod Cameron, Johnny Mack Brown, Tex Ritter, Eddie Dean e Lash La Rue.

Nos últimos anos, Jennifer participou de eventos como a Raleigh Western Film Fair 1989 e o Sierra Film Festival em Lone Pine, Califórnia, 1992.

Ela morreu em uma visita a Dorset, Inglaterra, Reino Unido, aos 77 anos.